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如何提升CY5/CY5.5熒光成像效果之光源篇

提升CY5/CY5.5的熒光成像效果，通常是從以下四個(gè)維度做出改進(jìn)，1.攝像頭；2.熒光光源；3.熒光濾色片組；4.熒光物鏡。在上一期的文章中，我們已經(jīng)分享過(guò)如何從攝像頭挑選角度提升CY5/CY5.5的成像效果，今天我們繼續講第二個(gè)維度，熒光光源。

光源如何影響CY5/CY5.5的成像效果？

CY5染料的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

熒光光源在熒光成像中的作用是激發(fā)熒光染料，要討論如何更好地激發(fā)熒光，就要先從熒光染料的光譜特性說(shuō)起。我們看到的很多資料都會(huì )寫(xiě)著(zhù)熒光染料的激發(fā)波長(cháng)和發(fā)射波長(cháng)，這兩個(gè)數值都是峰值數值，以便描述，在峰值附近其實(shí)還有一定的范圍會(huì )有激發(fā)和發(fā)射，只是這些波段的熒光效率相對低，效果沒(méi)那么好。

理想的熒光光源，一需要光譜覆蓋熒光染料的峰值激發(fā)波長(cháng)，二需要在這個(gè)波長(cháng)有較高的光強，這樣才能獲得更好的激發(fā)效果，對于CY5來(lái)說(shuō)這個(gè)數值大概在650nm左右，而CY5.5則在670nm左右。

汞燈光源的光譜分布

CY5/CY5.5成像效果不好，一個(gè)典型原因是常見(jiàn)的汞燈熒光光源并不適合CY5/CY5.5成像。通過(guò)汞燈光源的光譜圖，我們可以看到，汞燈600nm后的光譜沒(méi)有波峰，光強是比較弱的，因此理論上激發(fā)效果不會(huì )好。

汞燈實(shí)測的CY5成像光功率

而在實(shí)測中，汞燈光源在CY5波段的光功率也很明顯低于其他波段，還不到DAPI或GFP波段光功率的一半。

·傳統熱光源哪個(gè)更適合CY5/CY5.5成像？

傳統熱光源光譜特性對比

汞燈不是合適的CY5/CY5.5熒光光源，那么傳統熱光源中哪一個(gè)比較合適呢？這里對比四種傳統熱光源的光譜特性，其中鹵鎢燈為了方便在圖上呈現，呈現的數值是在實(shí)際數值基礎上做了10倍放大，也就是說(shuō)，雖然鹵鎢燈優(yōu)勢光譜集中在600nm后的區域，但光強太低，并不適合做熒光光源。

氙燈實(shí)測的CY5成像光功率

氙燈是傳統熱光源中更適合CY5/CY5.5的選擇，它跟汞燈都屬于高壓弧燈，穩定性比汞燈好，壽命可以到1000-2000小時(shí)，有著(zhù)近似太陽(yáng)的連續光譜、均勻光強，實(shí)測CY5的激發(fā)光功率大約可以到汞燈的2倍，但同時(shí)功率要到汞燈的1.5倍，且發(fā)熱大，另外DAPI波長(cháng)的激發(fā)效果也比較差。

·更值得推薦的CY5/CY5.5激發(fā)光源：LED熒光光源

LED熒光光源激發(fā)的CY5

傳統熱光源用于CY5/CY5.5成像有其局限性，目前成像效果比較好的有兩種光源，一種是搭配共聚焦/全內反射使用的激光光源，一種是適合普通熒光顯微鏡的LED熒光光源。LED熒光光源是更適合大部分用戶(hù)的選擇。

四通道光源MG-120的部分可選光譜

四通道光源MG-120可以按需配置4個(gè)LED熒光通道，每個(gè)通道獨立控制、獨立記憶光強，通過(guò)選配R波段激發(fā)配置，可以實(shí)現汞燈3-5倍的CY5/CY5.5激發(fā)效果，優(yōu)于氙燈，同時(shí)DAPI激發(fā)效果也優(yōu)于氙燈，更能全面滿(mǎn)足各種熒光染料激發(fā)需求。

MG-120壽命更長(cháng)，效果更好

此外，基于LED技術(shù)的MG-120作為熒光光源，不僅相比汞燈和氙燈熒光光源功耗低、發(fā)熱小、光強可調節，其使用壽命也可以達到5萬(wàn)小時(shí)，遠勝于汞燈和氙燈，大大降低了設備維護的人力成本和時(shí)間成本，讓實(shí)驗室得以更高效運行。

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