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　?。?）嚴格按照熒光顯微鏡廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序。

　?。?） 觀(guān)察對象必須是可自發(fā)熒光或已被熒光染料染色的標本。

　?。?）應在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后，接上電源，點(diǎn)燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強光穩定后，眼睛*適應暗室，再開(kāi)始觀(guān)察標本。

　?。?）載玻片、蓋玻片及鏡油應不含自發(fā)熒光雜質(zhì)，載玻片的厚度應在0.8～1.2mm之間，太厚可吸收較多的光，并且不能使激發(fā)光在標本平面上聚焦。載玻片必須光潔，厚度均勻，無(wú)油漬或劃痕。蓋玻片厚度應在0.17mm左右。

　?。?） 熒光幾乎都較弱，應在較暗的室內進(jìn)行。

　?。?）防止紫外線(xiàn)對眼睛的損害，在調整光源時(shí)應戴上防護眼鏡。

　?。?）選用效果的濾光片組。

　?。?）檢查時(shí)間每次以1～2h為宜，超過(guò)90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱;標本受紫外線(xiàn)照射3～5min后，熒光也明顯減弱;所以，zui多不得超過(guò)2～3h。

　?。?）熒光標本一般不能長(cháng)久保存，若持續長(cháng)時(shí)間照射（尤其是紫外線(xiàn)）易很快褪色。因此，如有條件則應先照相存檔，再仔細觀(guān)察標本。

　?。?0）熒光顯微鏡光源壽命有限，啟動(dòng)高壓汞燈后，不得在15min內將其關(guān)閉，一經(jīng)關(guān)閉，必須待汞燈冷卻后方可再開(kāi)啟。嚴禁頻繁開(kāi)閉，否則，會(huì )大大降低汞燈的壽命。標本應集中檢查，以節省時(shí)間，保護光源。天熱時(shí)，應加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應從開(kāi)始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再用時(shí)，須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應避免數次點(diǎn)燃光源。

　?。?1）標本染色后立即觀(guān)察，因時(shí)間久了熒光會(huì )逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)。

　?。?2）若暫不觀(guān)察標本時(shí)，可拉過(guò)阻光光簾阻擋光線(xiàn)。這樣，既可避免對標本不必要的長(cháng)時(shí)間照射，又減少了開(kāi)閉汞燈的頻率和次數。

　?。?3）熒光亮度的判斷標準：一般分為四級，即“一”—無(wú)或可見(jiàn)微弱熒光。“+”—僅能見(jiàn)明確可見(jiàn)的熒光。“++”—可見(jiàn)有明亮的熒光。“+++”—可見(jiàn)耀眼的熒光。

　?。?4）較長(cháng)時(shí)間觀(guān)察熒光標本時(shí)，一定要戴能阻擋紫外光的護目鏡，加強對眼睛的保護。在未加入阻斷濾光片前不要用眼直接觀(guān)察，否則會(huì )損傷眼睛。

　?。?5） 激發(fā)光長(cháng)時(shí)間的照射，會(huì )發(fā)生熒光的衰減和淬滅現象，因此盡可能縮短觀(guān)察時(shí)間，暫時(shí)不觀(guān)察時(shí)，應用擋板遮蓋激發(fā)光。