LED生物熒光顯微鏡是目前在光鏡水平對特異蛋白質(zhì)等生物大分子定性定位研究的最有力工具之一。熒光顯微鏡技術(shù)主要是用于檢測細胞上的特異熒光材料,與普通光學(xué)顯微鏡不同的是熒光顯微鏡增加了兩套濾光片。第一套稱(chēng)為激發(fā)光濾片,裝在光源和樣品之間,只有那些能激發(fā)熒光材料發(fā)光的特定波長(cháng)的光才能通過(guò)。第二套稱(chēng)為阻斷濾片,裝在物鏡和目鏡之間,只讓燃料所發(fā)出的熒光通過(guò)。在黑暗背景的襯托下,發(fā)出熒光的樣品很容易被觀(guān)察。
熒光顯微鏡技術(shù)包括免疫熒光技術(shù)和熒光素直接標記技術(shù)。例如,將標記熒光素的純化肌動(dòng)蛋白顯微注射入培養細胞中,可以看到肌動(dòng)蛋白分子組裝成肌動(dòng)蛋白纖維??蓪a(chǎn)生熒光的綠色熒光蛋白(greenfluorescent,GFP)基因與某種蛋白質(zhì)基因融合,在表達這種融合蛋白的細胞中,便可直接在活體狀態(tài)下觀(guān)察到該蛋白在活細胞內的動(dòng)態(tài)變化。不同熒光素的激發(fā)波長(cháng)范圍不同,所以同一樣品可以用兩種以上的熒光素標記,同時(shí)顯示不同成分在細胞中的定位。
LED生物熒光顯微鏡多采用200W的超高壓汞燈作光源,它是用石英玻璃制作,中間呈球形,內充一定數量的汞,工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電,引起水銀蒸發(fā),球內氣壓迅速升高,當水銀*蒸發(fā)時(shí),達到50~70個(gè)標準大氣壓力,這一過(guò)程一般約需5~15min。