熒光顯微鏡是以紫外線(xiàn)為光源,用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后在顯微鏡下觀(guān)察物體的形狀及其所在位置。
熒光顯微鏡用于研究細胞內物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線(xiàn)照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線(xiàn)照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
使用方法:
(1)打開(kāi)燈源,超高壓汞燈要預熱15min才能達到最亮點(diǎn)。
(2)顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片,在物鏡的后面裝上相應的壓制濾片。熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片、雙色束分離器、壓制濾片的插塊。
(3)用低倍鏡觀(guān)察,根據不同型號顯微鏡的調節裝置,調整光源中心,使其位于整個(gè)照明光斑的中央。
(4)放置標本片,調焦后即可觀(guān)察。使用中應注意:未裝濾光片不要用眼直接觀(guān)察,以免引起眼的損傷;用油鏡觀(guān)察標本時(shí),必須用無(wú)熒光的特殊鏡油;高壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開(kāi),需待汞燈*冷卻后才能再啟動(dòng),否則會(huì )不穩定,影響汞燈壽命。
(5)觀(guān)察。例如:在顯微鏡下用藍紫光濾光片,觀(guān)察到經(jīng)0.01%吖啶橙熒光染料染色的細胞,細胞核和細胞質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。